Problema de genética molecular.

Me gustaría compartir con vosotros uno de los problemas de genética molecular que estoy haciendo hoy:

No P-1.2. Estudiando la región reguladora del gen gog de un sapo asqueroso, el
doctorando Giner Vioso ha encontrado una secuencia interesante consistente en un
palíndrome de 30 pb. Para estudiarla, la aísla y la inserta en el plásmido pTRA1 de 12
kb de tamaño, a 2 y 3kb de distancia respectivamente de las dos únicas dianas para la
endonucleasa de restricción BamHI que hay en el plásmido. Ansioso de estudiar el
nuevo plásmido (pTRA2), realiza inmediatamente una serie de 5 experimentos
consistentes en tratamientos de pTRA2 con las enzimas que se indican, y electroforesis
posterior del ADN resultante. Los decepcionantes resultados se presentan en los carriles
1 a 5.
1. control
2. BamHI
3. S1 (endonucleasa inespecífica de
secuencia pero específica de ADN1c)
4. S1 + BamHI (tratamientos
sucesivos; antes de tratar con BamHI,
se elimina S1)
5. BamHI + S1 (tratamientos
sucesivos; antes de tratar con S1, se
elimina BamHI)
Para colmo, si repetía los experimentos
con el vector pTRA1, los resultados
eran idénticos
Consultada su sabia directora de tesis, ésta le sugiere que no sea impaciente, que
introduzca pTRA2 en una E. coli, que la cultive y que extraiga el plásmido de forma
muy cuidadosa. Le hace caso (cosa rara), repite los experimentos y le salen los
resultados mostrados en los carriles 6 a 10. Si hace lo mismo con pTRA1, le vuelven a
salir los resultados 1 a 5.
Explícale a Giner con dos frases como máximo y un esquema de esta zona, por
qué le salieron los experimentos la segunda vez pero no la primera.
Animado por los resultados, decide seguir estudiando el palíndrome. Establece
que la temperatura de fusión (Tm) del fragmento inicial de 30 pb es 60ºC y que la del
vector es 80ºC. Toma los pTRA2 extraídos cuidadosamente, los calienta a 65º, enfría
rápidamente la muestra y la somete al tratamiento 4. La electroforesis da sólo dos
bandas de 7 y 5 kb respectivamente. Propónle a Giner una explicación a este resultado.
Ahora decide estudiar la secuencia central del palíndrome que es:
5’ ATATATATAT 3’
3’ TATATATATA 5’
Fabrica palíndromes iguales al original que difieren sólo en la secuencia central,
los inserta en el vector pTRA1, obtiene muestras de ADN cuidadosamente extraído (ya
ha aprendido eso) y con ellos repite exactamente el último experimento descrito. Los
resultados son los siguientes
Secuencia central
(sólo se pone una de las cadenas)
Tm Resultado
(tamaño de las bandas)
5’ ATTTTTTTAT 3’ 60ºC 7 y 5 kb
5’ GCGCGCGCGC 3’ 75ºC 7, 3 y 2 kb
5’ GCGGGGGGGC 3’ 75ºC 7, 3 y 2 kb
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
12kb
7kb
5kb
3kb
2kb
Si hace el mismo experimento pero sin calentar previamente, en los tres casos
da las bandas de 7, 3 y 2 kb.
Explícale a Giner qué significa este resultado con una frase.

Leed atentamente y responded a la siguiente pregunta, por favor: ¿creéis normal que un chaval de tercero le tenga que expicar a un tío que se está sacando el doctorado el por qué de sus resultados?